ELISA試劑盒法檢測(cè)研討

ELISA試劑盒基因現(xiàn)已整合到銀耳基因組中；RT-PCR成果顯現(xiàn)，在銀耳細(xì)胞中可以動(dòng)物ELISA試劑盒檢測(cè)到人胰島素基因的mRNA；Southern雜交成果表明人胰島素基因以單復(fù)制的方式整合到銀耳基因組DNA中。本試驗(yàn)經(jīng)過(guò)設(shè)置農(nóng)桿菌與銀耳芽孢不同共培育時(shí)刻、誘導(dǎo)劑乙酰丁香酮的濃度、銀耳芽孢及農(nóng)桿菌ELISA試劑盒濃度等要素對(duì)轉(zhuǎn)化功率影響，成果在乙酰丁香酮濃度為500μmol/mL、銀耳芽孢濃度為108個(gè)/mL、農(nóng)桿菌OD=0.5及共培育時(shí)刻為2d時(shí)，轉(zhuǎn)化功率zui高，為310個(gè)轉(zhuǎn)化子/108個(gè)銀耳芽孢。轉(zhuǎn)化子轉(zhuǎn)接5代后對(duì)潮霉素仍有抗性，說(shuō)明外源基因在銀耳芽孢中可以不亂遺傳。在試驗(yàn)室已開(kāi)始樹(shù)立的農(nóng)桿菌EHA105介導(dǎo)銀耳轉(zhuǎn)基因辦法的基礎(chǔ)上。
ELISA試劑盒以銀菌株Tr21-01為動(dòng)身菌株，經(jīng)過(guò)凍融法將帶著有潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶（Hph）基因?yàn)檫z傳符號(hào)及人胰島動(dòng)物ELISA試劑盒素基因（BAC）為意圖基因的質(zhì)粒pBHg-BCA導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌GV3101，LBA4404和AGL-1中，并進(jìn)一步介導(dǎo)轉(zhuǎn)究。試驗(yàn)結(jié)L-1具有較高的轉(zhuǎn)化率；GV3101轉(zhuǎn)化率較低，且假陽(yáng)性較高；LBA4404無(wú)抗性菌落長(zhǎng)出。此成果表明不同的農(nóng)桿菌侵染銀耳芽孢才能具有差異性，且對(duì)受體侵染具有一定的特異性。本試驗(yàn)以農(nóng)桿菌EHA105為參照菌株，ELISA試劑盒對(duì)農(nóng)桿菌AGL-1介導(dǎo)轉(zhuǎn)化銀耳進(jìn)行研究。基于農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因受許多要素的影響，本試驗(yàn)從農(nóng)桿菌與銀耳芽孢共培育時(shí)刻、銀耳芽孢濃度、農(nóng)桿菌濃度、誘導(dǎo)劑乙酰丁香酮（AS）的濃度、轉(zhuǎn)率等方面進(jìn)行優(yōu)化。ELISA試劑盒其轉(zhuǎn)化條件優(yōu)化成果為：AGL-1菌液OD值為0.4～0.5，AS誘導(dǎo)培育濃度為250μg/mL、共培育濃度為150μ耳芽孢濃度為10~8/mL，共培育72h轉(zhuǎn)化率zui高，可達(dá)500個(gè)/10~8，且陽(yáng)性菌落為89%；EHA105菌液OD值為0.4～0.5。