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          上海研域生物人ELISA檢測(cè)試劑盒的操作步驟與方法

          發(fā)布時(shí)間: 2025-09-18  點(diǎn)擊次數(shù): 360次

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          人ELISA檢測(cè)試劑盒的操作方法:

          本方法首先將特異性抗體吸附于固相載體表面,我們把抗原和抗體吸附到固相載體表面的這個(gè)過程,稱為包被,也可叫做致敏。經(jīng)洗滌后分成兩組:一組加酶標(biāo)記抗原和被測(cè)抗原的混合液,而另一組只加酶標(biāo)記抗原,再經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色,這兩組底物降解量之差,即為我們所要測(cè)定的未知抗原的量。

          1. 包被抗體:用包被緩沖液稀釋特異性抗體球蛋白至*適濃度(1~10μg/ml),每凹孔加0.3ml,4℃過夜,或37℃水浴3小時(shí),貯存冰箱。

          2. 洗滌:移去包被液,凹孔用洗滌緩沖液(含0.05%吐溫-20)洗3次,每次5分鐘。

          3. 分2組,a組加酶標(biāo)記抗原和被檢抗原Elisa試劑盒混合液0.2ml,b組只加酶標(biāo)記抗原液0.2ml,37℃作用1~2小時(shí)。(混合液可作成不同稀釋度)

          4. 洗滌:移去包被液,凹孔用洗滌緩沖液(含0.05%吐溫-20)洗3次,每次5分鐘。

          5. 加入0.2 ml底物溶液于每個(gè)凹孔(OPD或OT),室溫作用30分鐘(另作一空白對(duì)照,0.4ml底物加0.1ml終止劑)。

          6. 加終止劑:每凹孔加2M H2SO4或2M檸檬酸0.05ml。

          7. 用酶標(biāo)比色計(jì)測(cè)定a、b兩組OD值,并求出a、b、OD值的差數(shù)。


          上海研域生物人ELISA檢測(cè)試劑盒的操作步驟與方法



          人ELISA檢測(cè)試劑盒的注意事項(xiàng):

          1. 干冰是固體二氧化碳,溫度為零下78℃,濕冰就是冰的溫度,一般為冷凍條件的溫度,如在零下20℃冷凍的冰的溫度為零下20℃。對(duì)于一些酶類等蛋白產(chǎn)品,需要干冰運(yùn)輸,其他大多數(shù)生化試劑采用濕冰即可;

          2. 運(yùn)輸常溫試劑的時(shí)候,不需要冰。對(duì)于需要冷藏的試劑,在用冰運(yùn)輸?shù)臅r(shí)候,要把試劑同冰之間有隔離物,不能直接接觸試劑包裝,如試劑外面加裝盒子,在盒子外面加冰,基本都采用冰塊,不能直接用水結(jié)成的冰,因?yàn)楸诨髸?huì)形成水,容易污染試劑。加冰塊的量沒有嚴(yán)格限制,以試劑Elisa試劑盒四周都處于冰塊包圍為宜;

          3. 不要小看生物試劑的量,很多抗體類試劑、酶類試劑是很貴的,可以達(dá)到上千元/mg(即每公斤幾百,上千萬元),其保存條件也是很嚴(yán)格的,否則容易失去活性。運(yùn)輸?shù)臅r(shí)候建議使用冰塊,而非碎冰,

          主要原因:
          (1)碎冰的溫度高,而冰塊的溫度更低;

          (2)冰塊可以更長(zhǎng)時(shí)間的保持低溫;

          (3)碎冰容易化成水。

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